多肽由多個氨基酸依次連接而成的化合物，氨基酸是兩性化合物，具有兩性離子的特性。

孔徑是指矽膠球上小孔的直徑。分子進入小孔，在小孔内被鍵合的烷基吸附，達到分離的效果。孔徑小，含孔率高，比表面積大，載碳量高。分子在孔内分離，孔徑大小必須和分子大小相匹配，分子必須能進入孔内，一般小分子使用80-120Å，大分子通常使用300Å，為了達到更佳分離，一般要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上。

低pH減少了酸性側鍊的解離，離子對試劑（比如三氟乙酸）與肽鍊堿性側鍊作用，中和其電性，電荷的減少使多肽的疏水作用增強，堿性多肽側鍊與矽醇基無法産生吸附，但離子對試劑會使得MS的離子化效率降低。

色譜柱：月旭UItimate^® XB-C18（2.1×100mm，5μm 300Å）。

流動相：梯度 A（0.1%三氟乙酸） B（0.1%甲酸乙腈）；

柱溫：40℃；

紫外檢測器：220nm；

流速：0.3mL/min；

進樣量：5μL。