
2022-07-28
色譜分析的重要作用之一是對樣品進行定量,色譜定量的依據是:組分的重量或濃度與檢測器的響應信号成正比。選擇合适的定量方法時,除需要考慮相對定量還是jue對定量外,同時也需要考察化合物的線性響應範圍、是否有合适内标、是否有标準品等。常見的定量方法有内标法、外标法、面積歸一法、加校正因子的主成分自身對照法與不加校正因子的主成分自身對照法等。本文将對更常用的内标法、外标法、面積歸一法三種方法進行介紹。
内标法
内标法是将一定重量的純物質作為内标物加到一定量的被分析樣品混合物中,根據測試樣和内标物的質量比及其相應的色譜峰面積之比及相對校正因子,來計算被測組分的含量。
精密稱(量)取對照品和内标物質,分别配成溶液,各精密量取适量,混合配成校正因子測定用的對照溶液。取一定量進樣,測量對照品和内标物質的峰面積,計算校正因子。
再取按标準制備中含内标物質的供試品溶液,進樣,測量供試品中待測成分和内标物質的峰面積,再計算含量(其中Ax:供試品圖中待測成份峰面積;A`S: 供試品圖中内标物峰面積;C`S:供試品圖中内标物濃度)。
内标物的選擇要求:
a原樣品中不含組分;
b與待測物保留時間應接近,但不重疊;
c為高純度标準物質,或含量已知物質;
d在給定色譜條件下具有一定化學穩定性。
外标法
外标法是用待測組分的純品作對照物質,以對照物質和樣品中待測組分的響應信号相比較進行定量的方法。它不是把标準物質加入到被測樣品中,而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨測定,把得到的色譜峰面積與被測組分的色譜峰面積進行比較求得被測組分的含量。此法可分為外标一點法與标準曲線法。
标準曲線法:是用對照物質配制一系列濃度的對照品溶液确定工作曲線,求出斜率、截距。在完全相同的條件下,準确進樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液,根據待測組分的信号,從标準曲線上查出其濃度,或用回歸方程計算,工作曲線法也可以用外标二點法代替。
外标一點法:是用一種濃度的對照品溶液對比測定樣品溶液中組分的含量。
精密稱(量)取對照品和供試品,配制成溶液,分别精密稱取一定量,進樣,測量對照品溶液和供試品溶液中待測物質的峰面積(或峰高)來進行計算:
如标準中有系統适用性要求,首先需确認系統溶液能滿足條件,否則檢測無效。一般要求對照品配制兩份,一份連續進5針以計算RSD,如無特殊要求,RSD不超過2%。符合了,說明系統沒問題,再進行後面的實驗。樣品也同樣需要配制兩份,兩份樣品更終結果的RSD同樣不能超過2.0%。
面積歸一法
由于組分的量與其峰面積成正比,按各品種項下的規定,配制供試品溶液,取一定量進樣并記錄色譜圖,測得各峰的峰面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積,計算各峰面積占總峰面積的百分比。
計算公式:
總雜(%)=1-主成分峰面積百分比
單雜峰直接從積分結果表中讀取即可
此法結果很不準确,一般在工藝研究、原料合成過程中的中間體等中用來檢測大緻數據做參考用。