凝膠過濾層析是利用具有多孔網狀結構的凝膠顆粒的分子篩作用，根據被分離樣品中各組分分子量大小的差異進行洗脫分離的一項技術。今天主要為大家介紹一下凝膠過濾層析中的一些重要參數。

#1 凝膠顆粒大小

指不能進入凝膠顆粒内部孔隙的更小分子的分子量。排阻極限反應某種凝膠能有效分離的更大分子量，所有大于排阻極限的分子均被完全排阻，不能分離。如Tandex G25的排阻極限為5000Da，它表明分子量大于5000Da的分子為全排阻。

所能進入凝膠内部孔隙的更大分子和更小分子的分子量範圍。它表示一種凝膠适用的分離範圍，如Tandex G25對球形蛋白的分級分離範圍為1000-5000Da，它表示通過Tandex G25可有效分離分子量在這個範圍内的球形蛋白。

柱内凝膠顆粒之間的空隙體積的總和，用V_o表示。

幹膠溶脹後顆粒本身所固有的體積，用V_g表示。

凝膠顆粒内部孔隙體積的總和，或者為小分子溶質可滲透進入凝膠内部體積的總和，又稱固定相體積，用V_i表示。

凝膠柱裝成後從柱底闆到凝膠沉積層表面的總體積，又稱床體積，用V_t表示。

式中，K_d是分配系數；V_e一般介于V_o和V_o+V_i之間。對于完全排阻的大分子，由于其不進入凝膠内部，隻能在顆粒間隙中流動，故其洗脫體積V_e=V_o；而對于完全滲透的小分子，由于它可在整個凝膠柱内流動（忽略V_g），故其洗脫體積V_e=V_o+V_i；分子量介于兩者之間的分子，它們的洗脫體積也介于兩者之間；一些吸附蛋白在更後洗出。