
2022-06-16
嘔吐毒素(vomitoxin),又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON),化學名為3α, 7α, 15一三羟基草鐮孢菌-9-烯-8-酮,屬于單端孢黴烯族化合物,主要由禾谷鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌、拟枝孢鐮刀菌、粉紅鐮刀菌、雪腐鐮刀菌等鐮刀菌産生。另外,頭孢菌屬、漆班菌屬、木黴屬等的菌株都可産生該毒素。單端孢黴烯族毒素共有150多種,是一類強有力免疫抑制劑,所引起典型症狀是采食量降低,所以這類毒素又叫飼料拒食毒素。嘔吐毒素是其中更重要一種毒素,主要來自鐮刀菌屬,尤其是禾谷鐮刀菌和黃色鐮刀菌由于它可以引起豬的嘔吐,故又名嘔吐毒素。
嘔吐毒素被列為3類緻癌物。它們具有很高的細胞毒素及免疫抑制性質,因此,對人類及動物的健康構成了威脅,特别是對免疫功能具有明顯的影響。DON廣泛存在于全球,主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物,也污染糧食制品,當人攝入了被DON污染的食物後,會導緻厭食、嘔吐、腹瀉、發燒、站立不穩、反應遲鈍等急性中毒症狀,嚴重時損害造血系統造成死亡。由于中國傳統飲食習慣中糧谷比例大大高于西方,使得嘔吐毒素的危害更為突出。谷物及飼料中DON的含量有嚴格的限量标準。我國谷物中DON的限量标準為1.0 mg/kg。
我國用于檢測嘔吐毒素的液相色譜法,常常會利用嘔吐毒素(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇)免疫親和柱,免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇,從而對脫氧雪腐鐮刀菌烯醇起到非常針對性的純化作用。
利用抗原抗體反應,抗體連接在柱體内,樣品經過提取、過濾後,緩慢的通過脫氧雪腐鐮刀菌烯酵免疫親和層析柱,在免疫親和柱内毒素與抗體結合,之後洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他無關物質,再用甲醇洗脫,然後用于檢測。過淨化柱後可直接用于液相脫氧雪腐鐮刀菌烯醇含量的檢測,可提高檢測方法的準确度,達到快速測定的目的。
參考标準《GB 5009.111-2016 食品安全guo家标準 食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的測定》 ,月旭嘔吐毒素(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇) DON免疫親和柱完成符合标準要求。以面粉為樣品,采用月旭嘔吐毒素(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇) DON免疫親和柱淨化,然後進行檢測。
淨化步驟
回溫:将免疫親和柱從低溫條件下取出後,恢複至室溫,将柱内液體放出;
上樣:待淨化液全部上樣,棄去;
淋洗:5mL磷酸鹽緩沖液,5mL水,棄去,抽幹柱子;
洗脫:加入2mL甲醇洗脫,抽幹柱子;
濃縮:将洗脫液置于 50℃水浴中氮吹至幹,用20%甲醇水定容至1mL,用0.22μm濾膜過濾,上機測定。
色譜條件
色譜柱:月旭Ultimate® XB-C18 4.6×150mm,5μm;
流動相:水:甲醇(80:20);
流速:1.0mL/min;
柱溫:30℃;
進樣量:20μL;
波長:218nm 。
回收率結果如下圖:
圖一:面粉樣品空白圖譜
圖二:面粉樣品加标2.0mg/Kg圖譜
圖三:嘔吐毒素标準品1mg/L圖譜
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