考馬斯藍染色法又稱Bradford法，是Bradford于1976年建立起來的一種蛋白質濃度的測定方法。考馬斯亮藍G-250測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。在遊離狀态下呈紅色，更大光吸收在488nm；當它與蛋白質結合後變為青色，蛋白質-色素結合物在595nm波長下有更大光吸收。

分析天平、燒杯、玻璃杯、移液槍、紫外分光光度計或酶标儀。

①标準蛋白溶液：常用牛血清蛋白（BSA），配制1mg/mL的标準溶液。

②0.01%考馬斯亮藍染色液G-250：稱取0.01g考馬斯亮藍G-250，溶于95%乙醇中，加85%(m/V)的磷酸10mL，更後用超純水定容至100mL，裝入棕色瓶中保存。（不宜久存，室溫1-2個月）

紫外分光光度計測定

将表格所示溶液加入試管中充分混勻，10min後倒入比色皿，放入紫外分光光度計于595nm測定吸光值，1号管作為空白對照，以蛋白濃度為橫坐标，吸光值為縱坐标，繪制标曲作為定量依據。

②樣品測定

取含10-100μL蛋白質溶液于小試管中，加水稀釋至0.1mL，然後加入5mL G-250蛋白染色液，充分混勻，10min後倒入比色皿，放入紫外分光光度計于595nm測定吸光值，1号管作為空白對照，将測得吸光值帶入标準曲線計算樣品中的蛋白質含量。

酶标儀測定

将表格所示溶液依次加入酶标闆中混勻，靜置10min後，放入酶标儀中于595nm測定吸光值，A孔作為空白對照，以蛋白濃度為橫坐标，吸光值為縱坐标，繪制标曲作為定量依據。

②樣品測定

取含4-40μL蛋白質溶液于酶标闆中，加水稀釋至40μL，然後加入250μL G-250蛋白染色液，充分混勻，靜置10min後，放入酶标儀于595nm測定吸光值，A孔作為空白對照，将測得吸光值帶入标準曲線計算樣品中的蛋白質含量。

①通常會将樣品稀釋多個梯度進行測定，防止樣品測得吸光值過高，超出标曲導緻的含量計算偏差。

②樣品中若含有去污劑，如TritonX-100、SDS等，會嚴重幹擾測定結果。

③比色反應需在1h内完成，如果測定要求很嚴格，可以在染色液加入後的5-20min内測定吸光值，因為在這段時間内顔色是更穩定的。

④測定時，蛋白-染料複合物會有少部分吸附在比色皿杯壁上，測試完後可用乙醇溶液将比色皿中的殘留物沖洗掉，再用超純水沖洗幹淨保存。