之前跟大家分享過一些色譜柱使用過程中的相關問題解答，包括“峰拖尾的解決思路”、“柱壓升高過快的解決思路”、“色譜柱壽命不理想的解決思路”等等（點擊藍字回看往期内容），受到了大家的熱烈歡迎，大家對這些内容的關注度以非常的高。

我們今天再帶來一個熱點問題的解決思路——“批次性之間重現性不好的解決問題”！

如果預期一個方法會被用到很多年，重現性将是色譜柱選擇過程中的一個重要問題，需要确認方法在使用期間，色譜柱一直都在供應，意味着選擇一家大型的願意長期合作的廠商，選擇一種常見的鍵合相，盡量少選擇特殊或者較少使用的固定相。可以先選擇一直合作的品牌開始，還應該從廠商出獲得更多的色譜柱規格和批次重現性調查信息，綜合評判。

以反相填料為例：同一批次的填料生産出不同的色譜柱，保留時間，塔闆數，柱壓，都會有點差異。

保留時間的改變與填料密度和色譜柱的體積成正比，色譜柱體積重現性取決于柱内徑，柱内徑改變後，保留時間會相應改變，但分離度保持不變，那說明你的方法重現性還是比較好的，在我們制定方法的時候，要正确的規定方法的洗脫時間表。生産廠家對柱體積改變效應造成的保留時間的改變RSD在3%左右，月旭從硬件上進行控制，将該數值控制在1%左右。

色譜柱塔闆數的變化也會影響方法，特别是涉及到剛好能基線分離的一對色譜峰時，一般情況下塔闆數的重現性在±10%左右，标準偏差減少至2-3%，但塔闆數是一個平方數，分離度取決于塔闆數的2次方根，因此塔闆數改變2%意味着峰寬變化隻有1%，可以核查一下色譜柱制造商的塔闆數出廠控制數據。

任何填料在生産的過程中，柱壓的重現性都比較好。

不同批次之間的色譜參數的重現性問題，那麼上面提到的參數會有所改變，更重要的是不同批次的填料有可能引起分離選擇性的變化，一位置相對保留時間會變化，表現在色譜圖上的相對位置改變，不利于方法的确定。這個問題要避免的，可以從生産商那裡收集批次重現性是否穩定的信息，一般是檢測填料色譜性能的理化參數。

在理化參數中，更重要的是填料的比表面積，因為他的改變直接導緻保留時間的改變，比表面積的變化範圍在±10%，月旭控制在±5%。

在化學參數中，鍵合相的便面覆蓋率的改變對保留時間的影響比較大，通常制造商會給出載碳量這個數值，會有一個詳細的數值，通常範圍是±10%，月旭控制在±4%以下。

制造商會有一個測試色譜重現性的試劑，采用尿嘧啶、苯酚、4-氯硝基苯、甲苯的混合溶液流動相是75%的有機溶劑水的中性條件，對疏水化合物之間的相對保留時間重現性一般比較好，而對于載碳量的改變不太敏感，較好的批次重現性測試是在測試混合物中加入堿性化合物，經過優選的堿性化合物（通常選用阿米替林）在優化過的條件下，主要和填料上遊離矽醇基相互作用，而中性化合物主要和鍵合相相互作用，這樣，堿性和中性化合物之間的相對保留時間是對反相填料批次重現性的嚴格測試。月旭積累了這一類批次重現性的測試數據，并控制在一個較小的範圍内。

上面說到的廠家對重現行的控制和要求，是用于選擇色譜柱的起點，更終測試是對項目本身的重現性測試，一些生産商會有不同批次的填料色譜柱包來用于具體項目測試，而另外一些生産商會根據客戶的需求提供類似的不同批次的色譜柱，我們需要的是不同時間鍵合相的相同填料裝填的色譜柱，而不是同一批次填料不同時間裝填的色譜柱，建議使用三個不同批次鍵合的填料裝填的色譜柱來測試方法的重現性，如果測試不受填料變化的影響，那可以相信該方法在幾年内都是重現的。

看完這一期的“解決思路”感覺對您有所幫助嗎？如果能夠幫到您那就是我們更開心的了，針對色譜柱的使用維護您還有什麼問題想要尋求幫助與解答嗎？可以在文末留言，我們會選擇提問頻率較高的問題來為大家解答！