
2020-08-10
圖|蛋白純化填料
天然産物是指從動物、植物及微生物中分離出來的生物二次代謝産物,自從發現來自天然界的有機化合物具有特殊的生理活性後,已經開發出許多具有治療和保健作用的藥物。
由于天然産物往往含有結構、性質不同的多種成分,且有效成分的含量一般較低。為了研究和開發天然産物,就要選擇合适的層析填料,從複雜的中草藥組成成分中提取、分離出有活性的單體純成分。
産品介紹
葡聚糖凝膠LH-20通過葡聚糖凝膠 G-25的羟丙基化制備,并且專門适合用于有機溶劑分離嗜脂性分子,天然産物在有機溶劑中的純化,例如類固醇,萜類化合物,脂質和低分子量肽。
産品參數
産品 | Tandex LH-20 |
幹粉粒徑 | 30-120µm |
排阻限(球蛋白) | <5kDa |
pH穩定性 | 2-13(短時間,在位清洗) |
更大流速 | 700cm/h |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
貯存溫度 | 避光,幹燥,4-30℃ |
葡聚糖凝膠 LH-20 的使用方法
将幹粉浸泡于 60-70%乙醇中(充分攪拌),洗去可能存在的殘留物,抽幹然後濕态不間隙裝柱,jue對不能出現凝膠斷層(否則要重新裝柱),動态用一倍柱體積的 60-70%乙醇淋洗,再用水洗淨乙醇即根據自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩為止,如改變溶劑應該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質,并根據性質确定柱高。如使用相同的溶劑,在以後的層析中柱平衡可以省略。
葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑
葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類:反相和正相兩種。用得更多的是反相溶劑洗脫,以甲醇——水系統更為常見,先用水,逐漸增加甲醇比例,更後用 100%甲醇沖柱。正相系統以氯仿——甲醇更為常見,先用 50%氯仿——甲醇,逐漸增加甲醇比例,更後用 100%甲醇沖柱。
樣品的處理和洗脫溶劑的選擇
如果樣品極性大,選用反相溶劑洗脫(甲醇——水),樣品用更少體積的甲醇——水(盡可能甲醇少一些)溶解,過濾後,濕法上樣(必須要進行過濾!否則把葡聚糖凝膠 LH-20 堵塞,就必須将葡聚糖凝膠 LH-20 的柱頭部分棄去, 造成不必要的浪費) 。如果樣品極性小, 這選用正相溶劑洗脫 (氯仿——甲醇) ,樣品用更少體積的氯仿——甲醇溶解,過濾後,濕法上樣。
葡聚糖凝膠LH-20的分離技巧
(1)流速要控制好,流速不可太快,為了快加壓,分子篩效果會降低:過慢會導緻樣品在柱子擴散嚴重,達不到分離效果。
(2)柱子盡可能長,Tandex LH-20 柱長的增加将極大地改善分離,所不要吝惜填料,甯可将填料全裝在一根大柱子中,不要将填料裝成幾根小柱。所謂集中優勢兵力,打擊敵人。
(3)餾分一定要接的細,可1/10,或1/20 個保留體積接成一餾分。
(4) 洗脫體積一般為2-3個保留體積,對特殊保留強的化合物,可洗脫5個保留體積。
(5)如果黃酮類化合物粗提物中有鞣質,那麼你就要小心了,Tandex LH-20對鞣質幾乎是死吸附的。如果不考慮填料,可用Tandex LH-20分鞣質。
(6)填料反複使用,每次用完,一般可用甲醇将柱子洗幹淨,然後用下一次分離的起步溶劑将甲醇替換出來。